EPC(鯉魚上皮細胞)
EPC(鯉魚上皮細胞)
一、生長特性:Adherent貼壁細胞
二、培養溫度:25°C (20-30°C)
三、敏感病毒:
Infectious pancreatic necrosis virus傳染性胰腺壞死病毒
Infectious hematopoietic necrosis virus傳染性造血壞死病毒
Spring Viremia of Carp Virus鯉春病毒血症病毒
Viral hemorrhagic septicemia virus病毒性出血性敗血症病毒
Epizootic hematopoietic necrosis virus流行性造血壞死病毒
Largemouth bass virus大口黑鱸病毒
四、培養條件
該細胞系的基本培養基爲ATCC制定的Eagle's Minimal Essential Medium培養基,目錄號30-2003。爲製作完整的生長培養基,向基礎培養基中添加以下成分:胎牛血清,最終濃度爲10%。
Eagle最低基礎培養基(Eagle's Minimal Essential Medium)簡稱MEME培養基,是一種細胞培養基,由Harry Eagle 研發,用於組織培養物中細胞的護理。本培養基配方中含有Earle's salts和非必需氨基酸、L-谷氨醯胺、丙酸鈉和碳酸氫鈉。本培養基中碳酸氫鈉含量減少(NaHCO3, 1.5 g/L),適用於5% CO2條件下培養。如果培養條件中CO2濃度高於5%,則需要增加碳酸氫鈉含量。
三、復甦
1、在20-30°C水浴中輕輕攪拌,解凍小瓶。爲減少污染的可能性,請將O形圈和蓋遠離水。解凍應迅速(約2分鐘)。
2、一旦內容物解凍,立即將小瓶從水浴中取出,並通過浸泡或噴灑70%乙醇進行去污。從這一點開始的所有操作都應在嚴格的無菌條件下進行。
3、將小瓶內容物轉移到含有9.0 mL完整培養基的離心管中,並以約125 x g的速度旋轉5至10分鐘。
4、用推薦的完整培養基重新懸浮細胞顆粒(有關培養物推薦稀釋比,請參閱特定批次信息),並分配到25 cm2或75 cm2培養瓶中。在細胞恢復過程中,避免培養基鹼度過高很重要。建議在添加小瓶內容物之前,將含有完整生長培養基的培養容器置於培養箱中至少15分鐘,以使培養基達到其正常pH值(7.0至7.6)。pH值(7.0至7.6)。
五、傳代
本協議中使用的體積適用於75 cm2的燒瓶;按比例減少或增加其他尺寸培養容器的分離培養基量。
1、取出棄掉培養液
2、用不含Ca++/Mg++的Dulbecco磷酸鹽緩衝鹽水(D-PBS)或0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA溶液短暫沖洗細胞層,以去除所有含有胰蛋白酶抑制劑的微量血清。
3、向燒瓶中添加1.0至2.0 mL胰蛋白酶EDTA溶液,並在倒置顯微鏡下觀察細胞,直到細胞層分散(通常在5分鐘內)。
4、添加6.0至8.0 mL完整生長培養基,輕輕移液吸取細胞。
5、向新的培養容器中加入適當的細胞懸浮液。建議接種量爲5 x 103至7 x 103活細胞/cm2。
6、在25°C下培養。我們建議將培養物的細胞濃度保持在1 x 105和2 x 105個細胞/cm2之間。
傳代率:1:4-1:6
六、凍存
添加5%(v/v)二甲基亞碸(ATCC 4-X)的完整生長培養基
培養時間:36h
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