高效液相色譜技術在藥物分析中的應用

本科生畢業論文

論 文 題 目： 高效液相色譜技術在藥物分析中的應用

學 生 姓 名： 孫琮莘                               

學      號： 20140000                                  

學      院： 藥學院                               

專 業 方 向： 中藥學                                  

班      級： 2014級03班

指 導 教 師： 李*                                 

論文完成日期： 2018年4月                

畢業論文（設計）誠信聲明書

本人聲明：本人 孫琮莘 （學號： 20140000 ）所提交的畢業論文《高效液相色譜技術在藥物分析中的應用》是本人在指導教師 李* 老師指導下獨立研究、寫作的成果，論文中所引用他人的無論以何種方式發佈的文字、研究成果，均在論文中加以說明；有關教師、同學和其他人員對本文的寫作、修訂提出過併爲我在論文中加以採納的意見、建議，均已在我的致謝辭中加以說明並深致謝意。

論文作者：               （簽字） 時間： 2018年 6 月   日

指導教師已閱：           （簽字） 時間： 2018年 6 月   日

畢業論文（設計）版權使用授權書

本畢業論文《高效液相色譜技術在藥物分析中的應用》是本人  孫琮莘 （學號： 20140000 ）在校期間所完成學業的組成部分，是在指導教師 李* 老師的指導下獨立完成的。因此，本人特授權山東中醫藥大學藥學院可將本畢業論文的全部或部分內容編入《山東中醫藥大學藥學院本科生優秀畢業論文集》（非正式出版）。

論文作者：           （簽字） 時間： 2018年 6 月   日

指導教師已閱：       （簽字） 時間： 2018年 6 月   日

高效液相色譜技術在藥物分析中的應用

孫琮莘

（2014級中藥學專業03班  學號：20140000）

[摘要] 本文着重闡述了高效液相色譜技術在藥物分析中的應用，主要包括對於天然藥物、抗生素、手性藥物、毒性藥物、違禁藥物、體內藥物的分析及雜質檢查，並對高效液相色譜技術的應用進行了展望。

[關鍵詞] 高效液相色譜技術；藥物分析；應用

The application of high performance liquid chromatography in pharmaceutical analysis

[Abstract] This paper focuses on the the application of high performance liquid chromatography in pharmaceutical analysis. It mainly includes the analysis of natural drugs, antibiotics, chiral drugs, toxic drugs, illegal drugs, internal medicine and impurity test. The application of high performance liquid chromatography was prospected.

[Key words] high performance liquid chromatography; Pharmaceutical analysis; application

1 高效液相色譜技術

高效液相色譜技術（High performance liquid chromatography）也稱高效液相色譜，是色譜法的一個重要分支，是在經典液相色譜法的基礎上於逐漸發展起來的[1-2]。高效液相色譜法（HPLC）的原理是在高壓條件下溶質在固定相和流動相之間進行的一種連續多次交換的過程，它藉助溶質在兩相間分配係數、親和力、吸附力或分子大小不同引起排阻作用的差別，使不同溶質得以分離[3]。HPLC主要是利用高效液相色譜儀來進行檢測的，主要的系統組成部分爲高壓輸液系統、進樣系統、色譜分離系統、檢測器和記錄器以及數據處理機等[4]。HPLC不受分析對象揮發性和熱穩定性的限制，適應性較廣，因而彌補了氣相色譜法的不足[5]。  

2 高效液相色譜技術在藥物分析中的應用

2.1 天然藥物分析

天然藥物結構複雜，種類衆多，其分析研究往往極具挑戰性，HPLC不僅能快速鑑定天然藥物成分，還能快速篩選出多種未知成分，爲分析複雜的天然藥物提供了強有力的工具[6]。狄志彪等[7]利用HPLC測定了不同發酵培養基中蟲草素的含量，採用了Welch Ultimate XB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）反相色譜柱，流動相爲水-甲醇（85:15，V/V），流速1 mL·min-1，檢測波長爲260 nm，爲進一步研究液體發酵蛹蟲草中蟲草素含量的分析提供了依據。張曉霞等[8]應用HPLC同時測定中藥梅花中的綠原酸、蘆丁、金絲桃苷和異槲皮苷的含量，以島津Inertsil ODS-4（4.6 mm×250 mm，5 μm）作爲色譜柱，流動相爲0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液，流速1 mL·min-1，檢測波長爲355 nm，爲制定梅花葯材質量標準提供了新的方法和參考。六味地黃丸爲熟地黃、山茱萸、山藥、澤瀉、丹皮和茯苓六中藥材組成的補腎名方，王靈霞等[9]建立了HPLC測定3種不同劑型六味地黃丸中沒食子酸、馬錢苷、芍藥苷和丹皮酚含量的方法，採用Agilent ZorbaxSB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，流動相爲乙腈-0.1%甲酸水溶液，流速爲1 mL·min-1，檢測波長爲240 nm，爲提高六味地黃丸質量控制標準提供參考，適用於不同劑型六味地黃丸的質量控制。

2.2 抗生素分析

抗生素是由微生物或者其他方法所產生的化學類物質，在高度稀釋的情況下還具備一定的抑制、消滅其他微生物存在的基本性能[10]。磺胺類藥物是常用的人畜共用的抗生素之一，水溶性較強，主要經糞尿途徑排出體外，在外界環境中發生遷移、轉化，對水環境和土壤環境造成潛在的威脅[11]。周愛霞等[12]建立了地下水、土壤及糞便中4種常用磺胺類抗生素的HPLC檢測方法，採用Agilent XDB C18色譜柱（150 mm×46 mm，5 μm），流動相爲0.1%甲酸-甲醇（7:3，V/V）混合液，流速0.8 mL·min-1，本方法適用於各種水體、土壤及糞便中的磺胺類抗生素的快速檢測。劉麗敏[13]建立了一種靈敏度高的測定人類血漿中奈替米星的高效液相色譜方法，色譜柱爲ZORBAX Eclipse XDB-C8柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相爲乙腈-水（90:10，V/V），流速爲1 mL·min-1，柱溫25℃，爲合理用藥，減少藥物的毒副作用和確保療效提供了一定的基礎。

2.3 手性藥物分析

兩種化學組成、分子式完全相同的化合物，但因組成化合物的原子在空間取向不同，而成爲鏡像的化合物，稱爲手性化合物[14]。手性藥物通常一種對映體具有強的生物活性和藥效，而另一種卻無效，因此利用HPLC對手性藥物對應異構體的拆分也是近幾年來研究的熱點。何建峯等[15]利用HPLC拆分了11對生物鹼類手性藥物對映體，採用3,5-二硝基苯甲酰化的β-環糊精（β-CD）硅膠手性固定相，結合正己烷-異丙醇，甲醇-φ=1%乙酸三乙胺（TEAA，pH=4.1），乙腈-φ=1%TEAA 3種流動相系統，檢測波長爲254nm，流速爲1 mL·min-1。許志剛等[16]利用HPLC對不同進樣量的撲爾敏進行了拆分實驗，採用醋酸纖維素固定相，以正己烷-異丙醇的混合溶液（9:1）作爲流動相，流速0.5 mL·min-1，柱溫30℃，檢測波長爲254 nm。

2.4 毒性藥物分析

微囊藻毒素是一種在藍藻水華污染中出現頻率最高，造成危害最嚴重的藻毒素[17]，閆建秀[18]建立了一種HPLC對微囊藻毒素分析的方法，色譜柱爲Zorbax SB C18柱（4.6×250 mm，5μm），柱溫爲30℃，流動相爲36%乙腈（含0.1%TFA），該方法準確性高，重現性好，適用於微囊藻毒素的分析測定。雜色麴黴毒素是一種黴菌毒素，人和動物在食用了被雜色麴黴毒素污染的糧食後會產生毒性效應，杜鵑[19]建立了一種基於HPLC檢測雜色麴黴毒素的方法，採用Nova-Pak C18（4μm，3.9mm×150mm）色譜柱，流動相爲甲醇-水（70-30，v/v），流速0.7 mL·min-1，檢測波長爲246 nm，柱溫32℃，爲保障人類健康和食品質量提供了基礎。

2.5 違禁藥物分析

沈志武等[20]採用HPLC測定了保健食品中他達拉非、西地那非、伐地那非等三種違禁藥物的含量，採用Prodigy 5μ ODS3 色譜柱（250mm×4.60mm），流動相爲乙腈-0.05 mol·L-1三乙胺（40:60），流速1.0 mL·min-1，檢測波長290 nm，爲檢測此類壯陽違禁藥物提供了分析依據。蔡增軒等[21]建立了一種HPLC同時測定保健食品中苯乙雙胍、芬氟拉明、格列齊特等10種違禁藥物的方法，採用Waters Atlantis ODS18柱（2.1 mm×150 mm，5.0μm），流動相爲10mmol·L-1乙酸銨-10mmol·L-1乙酸銨甲醇溶液，柱溫30℃，流速0.2 mL·min-1，爲加強市場管理，維護消費者的利益提供了基礎。

2.6 體內藥物分析

採用HPLC測定體內藥物及其代謝產物，可爲臨牀藥理學和毒理學等研究提供科學依據[22]。襲榮剛等[23]利用HPLC測定了人體血漿中鹽酸二甲雙胍的濃度，研究其藥動學和生物等效性，採用了Diamosil C18柱（200 mm×4.6 mm，5μm），流動相爲甲醇-磷酸鹽緩衝液（44:56），流速爲1.0 mL·min-1，檢測波長爲233 nm，爲臨牀指導用藥提供參考依據。李勇等[24]建立了一種HPLC測定人體內血漿中妥舒沙星濃度的方法，採用VP -ODS C18 （150 mm×4.6 mm，5μm），柱溫40℃，流動相爲甲醇-乙腈-0 .025 %磷酸（6:17:77），流速1.0 mL·min-1，檢測波長346 nm，該方法簡單、易操作，可用於妥舒沙星的血藥濃度檢測和藥動學研究。

2.7 雜質檢查

郭擁政等[25]採用HPLC技術建立了纈沙坦中潛在的遺傳毒性雜質2-氰基-4'-溴甲基聯苯和2-氰基-4',4'-二溴甲基聯苯的含量測定方法，色譜柱爲Kromasil C18 （4. 6 mm×250 mm，5μm），流動相爲乙腈-水-冰乙酸（700:300:1），檢測波長爲210 nm，流速0.8 mL·min-1，柱溫30℃，該方法簡便、準確、專屬性強，適用於纈沙坦遺傳毒性雜質檢測。姜恩鑄等[26]採用HPLC測定頭孢他啶的所含雜質，以 AlltimaC18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）爲分離柱，以乙腈和磷酸鹽緩衝溶液爲流動相，流速1.3 mL·min-1，柱溫35℃，檢測波長255 nm，從頭孢他啶藥物中共分離出14個雜質，爲中國藥典收載頭孢他啶類藥物中有關雜質的檢測方法奠定了基礎。

3 結語及展望

HPLC被認爲是時間最短、效能最高的藥物分析方法，但隨着藥物結構的不斷複雜化，單獨的應用HPLC已經不能滿足短時間內測定一種或幾種生物藥物的需求，因此，HPLC必須有所創新[27]。例如，在提供柱效方面，Waters 公司推出的Waters ACQUITYTM UPLC 超高效液相色譜系統，安捷倫公司推出的Agilent 1200 系列高效快速液相色譜系統等[28]；HPLC可通過聯用技術彌補自身不足，尤其是色譜-質譜聯用，色譜-光譜聯用等。HPLC作爲一種十分有效的藥物分析方法，已廣泛地應用於天然藥物、抗生素、手性藥物、毒性藥物、違禁藥物、體內藥物分析中，並且隨着該技術的不斷改進與發展，HPLC的發展會更爲廣泛。

參考文獻

[1] 王振濤，許蓓蓓. 高效液相色譜技術在食品檢測中的應用[J]. 現代食品，2017，(23):31-33.

[2] 郝童斐. 高效液相色譜技術在食品檢測中的應用[J]. 食品安全導刊，2017，(32):21.

[3] 丁峯. 高效液相色譜(HPLC)法在食品檢驗中的應用[J]. 科技與創新，2017，(24):148-149.

[4] 魏順芝. 高效液相色譜技術在水質檢測中的應用分析[J]. 地下水，2017，39(06):79-80.

[5] 呂麗卿，劉曉玥. 高效液相色譜檢測技術在飼料分析中的應用和重要作用[J]. 時代農機，2017，44(07):117-118+149.

[6] 孫翠榮，陳娟娟，潘遠江. 高效液相色譜/質譜聯用技術在天然來源生物活性成分快速識別中的應用[J]. 中國科學:化學，2010，40(06):621-630.

[7] 狄志彪，馬豔妮，陳新璐等. 液體發酵蛹蟲草中蟲草素含量分佈的研究[J]. 中國釀造，2016，35(02):84-87.

[8] 張曉霞，房經貴，陳世忠等. 高效液相色譜法測定中藥梅花中綠原酸、蘆丁、金絲桃苷和異槲皮苷的含量[J]. 中國醫院藥學雜誌，2016，36(02):107-109+156.

[9] 王靈霞，朱東亮，柴逸峯. 高效液相色譜法同時測定3種不同劑型六味地黃丸中4種成分的含量[J]. 藥學實踐雜誌，2013，31(04):296-299.

[10] 房真真，鞏天照. 高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應用[J]. 化工管理，2017，(29):121.

[11] 李彥文，莫測輝，趙娜等. 高效液相色譜法測定水和土壤中磺胺類抗生素[J]. 分析化學，2008，(07):954-958.

[12] 周愛霞，蘇小四，高鬆等. 高效液相色譜測定地下水、土壤及糞便中4種磺胺類抗生素[J]. 分析化學，2014，42(03):397-402.

[13] 劉麗敏. 高效液相色譜在中草藥和抗生素類藥物分析中的應用[D]. 西南大學，2008.

[14] 康自華，陽小成，陳婷. 高效液相色譜法在藥物分析中的應用[J]. 廣東微量元素科學，2006，(08):18-22.

[15] 何建峯，朱全紅，劉嵐等. 高效液相色譜法拆分生物鹼類手性藥物對映體[J]. 中山大學學報(自然科學版)，2002，(01):35-38.

[16] 許志剛，胡勁召. 高效液相色譜法分離手性藥物撲爾敏[J]. 瓊州大學學報，2006，(05):16-17+21.

[17] Duyt  N,  Lam  P  K  S,  Shaw  G  R.  Toxicology  and  risk  assessment  of  fresh  water cyanobacterial  (Blue-green  algae)  toxins  in  water  [J].  ron.  Contam.  Toxicol. 2000,163:113-186.

[18] 閆建秀. 水產品中微囊藻毒素的高效液相色譜檢測方法的研究[D]. 江南大學，2009.

[19] 杜娟. 高效液相色譜法測定糧食中雜色麴黴毒素的研究[D]. 南京財經大學，2011.

[20] 沈志武，唐宏兵，李羣等. 高效液相色譜法測定保健食品中他達拉非、西地那非、伐地那非違禁藥物含量[J]. 理化檢驗(化學分冊)，2008，(06):540-542.

[21] 蔡增軒，李剛，任一平. 高效液相色譜法檢測保健食品中的違禁藥物[J]. 中國食品衛生雜誌，2007，(01):36-40.

[22] 孟曉麗，李豔秋看，趙冬梅等. 高效液相色譜法在體內藥物分析中的應用[J]. 黑龍江醫藥，1998，(02):109-110.

[23] 襲榮剛，王曉波，石焱等. 高效液相色譜法研究人體內鹽酸二甲雙胍藥動學和生物等效性[J]. 中國新藥雜誌，2009，18(03):230-233.

[24] 李勇，袁洪，譚鴻毅等. 高效液相色譜法測定人體內血漿中的妥舒沙星[J]. 南華大學學報(醫學版)，2007，(01):104-106.

[25] 郭擁政，孫曉羣，陳程等. HPLC法測定纈沙坦中的遺傳毒性雜質[J]. 中國藥品標準，2016，17(05):337-340.

[26] 姜恩鑄，胡昌勤. 高效液相色譜法測定頭孢他啶的含量及雜質[J]. 色譜，2008，(01):75-79.

[27] 李乾，靳珅. 高效液相色譜在生化藥物分析中的應用與展望[J]. 山西大同大學學報(自然科學版)，2011，27(04):40-42.

[28]陳仁興.高效液相色譜法及其在中藥研究中的應用和展望[J].蛇志，2011，23(04):375-377+396.

致  謝

本論文是在導師李*的悉心指導下完成的，在他悉心指導和熱心幫助下讓我順利的完成了本課題的研究，導師高尚的人格魅力，學識的淵博，忘我的工作精神，將是我終生學習的榜樣。在此，對李老師對我在學習和生活中的關心和幫助表示衷心的感謝。

衷心的感謝山東中醫藥大學，讓我沉醉於古韻古香、博大精深的中醫藥文化之中，領略四大經典的深刻內涵及中藥的四氣五味，“厚德懷仁，博學篤行”的校訓，激勵着我努力拼搏，奮力向前。

最後，我要衷心的祝福在研究生期間幫助過我的老師、同學和朋友身體健康、萬事如意。